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FUS-50L(A)发酵罐消毒(非SIP)

实消

进料

消前体积=计料体积-消毒蒸汽冷凝水-消后合料体积-接种/移种体积,此时进料量以消前体积计。所用发酵罐罐体和补料均有称重设备,建议所有浓度均已质量分数计算。
配料时应充分考虑每种物料的性质,浓酸、片碱禁止直接混合,大多数金属离子、铵离子在酸性环境消毒,消后调pH,有丰富氮源的培养基葡萄糖分消,用量很少的物质配成母液按比例添加,不能耐受高温消毒的组分采用过滤除菌,接种前在火焰保护下加入或者补料形式加入。
 进罐前确认罐内清洗干净、罐底阀关闭、电极已校准安装。
 投料后加水至消前体积/质量。

夹套预热

 打开搅拌,低转速,建议小于200rpm,如有大量豆粉、淀粉等不溶物质,适当开空气。
注意:如需使用空气,须打开旁路阀门,将质量流量计前后阀门关闭,避免使用质量流量计控制流量,以防止出现意外时损毁质量流量计。
 确认夹套进水阀门关闭、夹套出水阀门关闭,尾气分析取样阀关闭;排气阀全开。
 打开夹套排凝阀门,缓慢打开蒸汽进夹套阀门,注意观察夹套压力表,压力不得高于0.2MPa,待夹套水排尽后,开大夹套进蒸汽阀,快速预热升温;等待温度到达95℃以上后,执行下一步(对于没有配备夹套排污疏水阀的产品,可以适当关小夹套排污阀)。
 确认质量流量计前后阀门关闭,质量流量计旁路阀门打开;保持转子流量计阀门和空气进过滤器阀门开,关闭空气进罐隔膜阀,关闭蒸汽进夹套阀门,保持夹套排冷凝水阀门全开,关闭搅拌。
 如果需要过滤器系统同步灭菌,保持质量流量计旁路阀门、转子流量计阀门开启,关闭空气进过滤器阀门和空气进罐隔膜阀,然后按照3.3 操作。
注意:如果需要减少罐内冷凝水量,蒸汽进夹套阀门可以保持一定较小的开度。

罐内进蒸汽

 打开罐底进蒸汽阀门,缓慢打开取样阀,待没有冷凝水大量流出后,维持取样口有少许蒸汽冒出,打开罐底阀进蒸汽,打开蒸汽进空气分布器阀门。温度到达100℃后,关小排气阀门,升温升压。

保压

 温度到达120摄氏度后,关小罐底进蒸汽阀门,用蒸汽进空气分布器阀门和排气阀控制温度维持在121±1℃。
 保压30min或者按工艺时间。
 保压过程中,保持接种口松动(由拧紧状态拧松半圈到一圈,建议在升温以前拧松,强烈不建议在带压状态操作),使接种口排气口有蒸汽冒出。

灭菌结束后自然降温降压

 保压结束后,关闭罐底阀,关闭蒸汽进空气分布器阀门,根据具体物性选择全关或者保持开度排气阀门。
注意:排气降温降压会使得发酵液一直处于剧烈沸腾状态,对于易气泡的发酵液禁止采用这种方式降温。

通气后一次水冷却

 罐温降低到110摄氏度后,打开空气进罐隔膜阀进空气,并仅能用此法门调整进气流量,根据物性调整排气阀门开度。
注意:易气泡发酵液应维持较高的罐压,使得温度始终低于沸点;易气泡发酵液通气量不宜过大。
 依次确认循环水进水阀门关,循环水排水阀门关,一次水排水阀门开,一次水进水阀门开;依次打开夹套排水阀,关闭夹套拍冷凝水阀,打开夹套进水阀,控制面板开手动冷却。打开搅拌通常不高于200rpm。
注意:通水冷却前一定要先通空气维持罐压;冷却过程中随时用排气阀控制罐压不低于0.05Mpa。

待用

 温度降低到60℃后温度设为自动;如需使用循环水,按以下步骤依次操作:
 关闭控温度控制。
 关闭一次水进水阀门。
 关闭一次水排水阀门。
 打开循环水回水阀门。
 打开循环水进水阀门。
 控制面板打开温度自控。

改为质量流量计控制

 确认转子流量有读数。
 控制面板设定质量流量计流量为1vvm以上,并开启自动。
 依次全开质量流量计前后阀门。
 观察面板上质量流量计,当质量流量计读数达到设定值后,缓慢关小质量流量计旁路阀门,直至关闭。
注意:若质量流量计流量读数没有达到设定值,可以尝试慢慢关小质量流量计旁路阀门,并观察质量流量计读数是否增加,如果增加,可以继续操作。
注意:质量流量计旁路关闭过程中,过滤器压力和罐压会下降,需要及时调整。
 调整空气进过滤器隔膜阀和排气阀,使得过滤器压力在0.1MPa,罐压0.05MPa。
注意:过滤器压力过高会使得质量流量计前后压差不足导致无法稳定控制,出现流量锯齿状。出现此现象要降低过滤器压力。
注意:过滤器压力高于罐压0.05MPa可以在一定程度上避免在空气系统失压导致料液进入空气管路。

标定DO满度

 达到培养温度、压力后,DO标定满度。

空消

 取下pH、DO等电极,仅仅保留温度电极,用闷头将电极接口堵住。
 向罐内加水没过温度电极,也可以空罐消毒。
 以下同实消夹套预热至一次水降温过程。

过滤器消毒

 确认空气进过滤器阀门关闭、空气进罐隔膜阀关闭。
 打开过滤器外壳旁路、隔膜阀旁路阀门。
 打开蒸汽阀门,调整隔膜阀旁路阀门开度,使得出口有少量蒸汽和水流出,过滤器排凝阀保持开度一圈左右,调整蒸汽进过滤器阀门开度维持过滤器压力0.10-0.20Mpa 30min。
注意:隔膜阀旁路阀开度过大会使得维持压力所需蒸汽流量升高,可能会使得过滤器穿孔。
 依次关闭隔膜阀旁路、过滤器外壳旁路、蒸汽进过滤器阀门。
 立即微开隔膜阀旁路,待过滤器外壳压力低于空压后,打开空气进过滤器阀门使空气进入过滤器
注意:停止蒸汽后,要立即排出部分蒸汽并通入空气,在过滤器温度降低之前吹干过滤器。
注意:由于过滤器在湿的状态阻力比较大,干了以后阻力迅速减小,因此,开空气进过滤器阀门时要缓慢,随着滤芯干燥,过滤器压力会随之下降,需要增加空气进过滤器阀门开度。
 缓慢开大隔膜阀旁路阀门,维持过滤器外壳压力0.1Mpa左右,待用。
注意:此处流量不宜过大,不能超出过滤器工作流量。

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