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FUS-50L(A)发酵罐使用

接种/移种

火焰圈保护接种

准备工作:操作人数以3人最佳,非操作人员离开房间,操作人员带好口罩,隔热手套;关闭门窗、空调风扇;3人分别负责持接种钳、传递种瓶和接种。
注意:严禁带橡胶或者塑料薄膜手套,一旦发生烧伤会更严重。
 用湿抹布盖住搅拌电机以及周围管道,以防止电机和硅胶管被烧坏。
 向火圈棉花上滴加无水酒精至饱和并置于接种口。
 关小进气流量,全开尾气阀门。
 预先拧松接种口盖子。
 持接种钳者用接种钳钳住接种口盖子,点燃火圈,用接种钳拧下接种口盖子,并置于接种口远离接种者方向,盖子内测朝向火焰。
 传递种子瓶者将捆扎棉线解下,如是棉塞,将棉塞外部包裹纱布取下,递给接种者。
 接种者在火焰旁边取下种瓶纱布或棉塞,火烧种瓶瓶口一圈后缓慢将种子液倒入罐中。然后递给传递种瓶者,同时,传递种瓶者将下一瓶种子递给接种者。
 所有接种完成后持接种钳者拧上罐盖,用湿抹布熄灭火圈,恢复罐压和通气。
注意: 预先估计接种时间,保证火焰时间足够长,如果种瓶数量较多,预先合瓶。
注意:接种速度不宜过快,否则可能会导致种子液溢出,导致无菌失效。
注意:接种后和种瓶上部温度很高,禁止手持种瓶上部。
注意:严禁向燃烧的火圈上添加酒精。
注意:火圈掉落地面后立即用湿抹布覆盖。

移种管道移种

准备工作:

 记录此时所有发酵罐重量。
 取下种子罐、发酵罐的取样口末端,连接移种管道。
注意:移种准备需要约40min,注意在移种前完成所有准备操作

移种管道消毒:

 依次从种子罐的最远端到种子罐打开蒸汽进罐底阀、取样阀,打开种子罐的移种管道排凝阀门,消毒30min。
 记录此时最远端发酵罐的罐重。

消毒结束:

 关闭移种管道排凝阀门,依次从种子罐到最远端发酵罐关闭蒸汽进罐底阀,罐底最后一个发酵罐罐底进蒸汽阀门后立即打开此罐罐底阀,维持移种管道压力。
 待移种管道冷却。

移种:

 升高种子罐罐压至0.1MPa,维持发酵罐罐压0.05Mpa,从最远端发酵罐开始移种。
 最远的发酵罐移种计量初始值以第二次记录的罐重为准,计算移入指定量的种子液后罐重。移种时,打开种子罐罐底阀,到达目标罐重后关闭发酵罐罐底阀,保持种子罐罐底阀开启。
 从次远端发酵罐开始,以当前的罐重作为计量初始值,计算移入指定量的种子液后罐重。打开对应发酵罐罐底阀,等待到达目标罐重后,关闭罐底阀。过程中保持种子罐罐底阀开启。

移种结束

 所有移种完成后,关闭种子罐罐底阀,将种子罐与移种管道连接断开(可能会有发酵液溅出),移种管道置于水中,从最远端开始开启所有发酵罐的蒸汽进罐底阀,用蒸汽将移种管道冲洗干净。关闭所有蒸汽进罐底阀。
 取下移种管道,恢复取样口,(根据情况,如果需要取种后样)再次打开蒸汽进罐底阀对罐底阀继续蒸汽消毒。
 记录此时所有发酵罐罐重,与第一次记录的差值作为实际接种量。
 清理移种管道中排出的发酵液,根据需要处理种子罐。

培养

补料

补料瓶制作

 制作补料棉塞:取合适大小方形双层纱布,中间依照补料硅胶管管径大小穿孔,瓶内硅胶管长度到平底,将纱布蒙住瓶口,硅胶管置于中央,逐层填充棉花,直到纱布进入瓶内2/3,继续在瓶口堆棉花,然后扎紧纱布。
注意:棉花不能使用医用脱脂棉。
注意:瓶内管口要斜切,防止吸附到瓶壁无法出液。
注意;棉花填充松紧程度以拔出棉塞能听到砰的一声为好。
 连接补料针头:将硅胶管出口一侧连接补料针头,并用扎带或者棉绳扎紧。

补料瓶的计量

 记录空瓶质量(包括棉塞和硅胶管),固体料质量,溶解后质量,消后质量。
 瓶中溶液质量浓度=固体料质量/(消后质量-空瓶质量)

补料瓶的消毒

 将补料针装入无盖的10mL离心管,在离心管口处对折,用纱布和牛皮纸包扎。
 在补料管靠近瓶口处用棉线或者止水夹加死管道。
 放入灭菌锅消毒。

补料的连接

 拧松补料接口帽。
 点燃酒精棉球并置于补料口旁边。
 拧开补料接口。
 取出补料针。
 对准补料硅胶垫中心位置,竖直扎入。
 熄灭酒精棉球。
 用75%酒精棉球塞住补料针周围位置。
 管道装入蠕动泵并加紧。
 打开止水夹。
注意:消泡和pH控制的补料瓶制作同上,以下不再叙述。氨水、甲醇属于易挥发物质通常情况下无需并且不能进行高温消毒。

自动/手动补料

 手动补料:按下面板上手动补料按钮,补料泵将持续转动,直到到达所需补料量。
 自动补料:按下面板上自动补料按钮,补料泵将按照设定的占空比控制泵的开停。

换料

 当一瓶补料接近用完时,在控制面板上停止自动或者手动补料。
 按下换料按钮。
 将补料针头从补料硅胶垫上拔出,塞入一小团酒精棉,拧上补料口盖。
 将补料管用止水夹夹住并从蠕动泵上取下。
 按照上述方法将一瓶新的补料连接到一个未用过的补料口。
 控制面板上关闭换料操作。
 继续按照工艺补料。
注意:如果没有点击换料按钮,会使得补料累计不准确。

消泡

 手动消泡,按下面板上手动按钮,消泡泵将持续转动泵入消泡剂。
 自动消泡,连接好液位传感器,当有泡沫时,系统报警,同时启动消泡泵,按照设定的占空比补加消泡剂。
 作为补料,按下消泡模式,可将消泡泵作为补料泵使用,方法同上所述。

pH控制

 首先确定发酵过程中pH控制方向,在面板上确认控制方式。
 连接好酸(碱),点下面板上的pH自动。当pH向控制方向的反方向偏移超过设定值后,就会自动补加酸(碱)。

取样

 取样前消毒:打开罐底进蒸汽阀,取样阀,排出管道内冷凝水;关小取样阀,维持取样口有少许蒸汽和冷凝水排出,维持20min。
 取样:关闭蒸汽进罐底阀,打开罐底阀,排出少量料液后,用离心管或者小三角瓶取样,取样后关闭罐底阀。
 取样后消毒:打开罐底进蒸汽阀,排出管道内残余发酵液后,关小取样阀,维持取样口有少许蒸汽和冷凝水排出,维持20min,关闭蒸汽进罐底阀,关闭取样阀。

结束

停止发酵

 关闭所有自控(温度、pH、流量、搅拌、DO)
 关闭空气进罐体隔膜阀
 关闭尾气冷凝进水回水阀门
 排气阀门全开
 关闭尾气分析阀门
注意:若在连续使用中减少过滤器消毒次数,关闭质量流量计之前打开质量流量计旁路阀门,然后关闭空气进罐体隔膜阀以保证过滤器前正压。

灭活发酵液

 蒸汽煮:开搅拌200rpm,关闭夹套进水阀门,夹套排水阀门,打开夹套排凝阀门,夹套进蒸汽阀门,将罐温升高到100℃,维持10min,降温,排放处理
 碱水泡:直接将发酵液排放到水桶,加入适量的片碱,浸泡2小时以上,排放处理
注意:如果发酵液有后处理,按后处理需要进行处理。

清洗

 拆下电机电源线、电极测速线、压力传感器变送线、视镜灯。
 拆下pH、DO电极,用水清洗干净分别浸入饱和KCl和水中;电极口装上闷头。
 取下排气冷凝器,并清洗。
 取下补料针头。
 取下电机妥善放好。
 取下所有罐盖连接螺丝。
 拉住罐盖提手取下罐盖,取罐盖过程中,搅拌轴不得与罐壁碰撞,不得用手握搅拌轴,取出后搅拌轴朝上放置。
 清洗罐盖和罐体,必要时拧下罐底进行清洗。
 清洗完毕后将罐盖放回,接种口朝外,边缘对齐,拧紧罐盖(对称拧紧)。
 电机接口朝后装回电机,拧紧电机固定螺丝,连接电机电源和测速。
 安装排气冷凝罐和尾气管。
 若要长期不用,用空气将罐内吹干。

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